0512-63061203
腺病毒載體（Adenovirus）能夠攜帶大片段外源DNA、感染分裂細(xì)胞和非分裂細(xì)胞、誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答（這對(duì)于疫苗開(kāi)發(fā)是有益的）、表現(xiàn)出高效率的轉(zhuǎn)導(dǎo)和高水平的轉(zhuǎn)基因表達(dá)、不整合細(xì)胞DNA（在細(xì)胞內(nèi)保持dsDNA游離體）。這些特性使腺病毒作為用于基因治療的轉(zhuǎn)基因載體、疫苗載體和溶瘤病毒療法中使用的載體。我們開(kāi)發(fā)出一系列專有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了腺病毒包裝工藝水平。
| 目錄號(hào) | 產(chǎn)品信息 | 規(guī)格 | 滴度 | 價(jià)格（CNY） | 生產(chǎn)時(shí)間 |
|---|---|---|---|---|---|
| H106 | 干擾腺病毒（一個(gè)干擾病毒） | 1ml | 1*1010PFU/ML | ￥4800 | 25個(gè)工作日 |
| H107 | 干擾腺病毒套餐（三個(gè)干擾病毒一個(gè)陰性對(duì)照） | 4*1ml | 1*1010PFU/ML | ￥11000 | 30個(gè)工作日 |
| H108 | 過(guò)表達(dá)腺病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因長(zhǎng)度*￥1+￥6880 | 咨詢 |
| H109 | 過(guò)表達(dá)腺病毒4000bp以下 | 1ml | 1*1010PFU/ML | 基因長(zhǎng)度*￥1+￥6880 | 咨詢 |
| H110 | 腺病毒陰性對(duì)照 | 1ml | 1*1010PFU/ML | ￥1500 | 10個(gè)工作日 |
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 非純化慢病毒制備服務(wù) | 純化慢病毒制備服務(wù) |
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| 交付內(nèi)容 |
定制病毒，按照規(guī)格交付：
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定制病毒，按照規(guī)格交付：
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對(duì)照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)贈(zèng)送：
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對(duì)照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)選購(gòu)：
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聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈(zèng)送 |
聚凝胺（Polybrene，5 mg/ml，200 ul），贈(zèng)送 |
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輔助病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)選購(gòu)：
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輔助病毒，按照定制病毒的規(guī)格對(duì)應(yīng)選購(gòu)：
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| 病毒重懸液 | 腺病毒專用儲(chǔ)存液 | GTS緩沖液 |
| 運(yùn)輸/存儲(chǔ) | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 | 干冰/-80°C，避免反復(fù)凍融 |
| 推薦應(yīng)用 | 體外培養(yǎng)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) | 動(dòng)物體內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo) |
為了更好地開(kāi)展您的實(shí)驗(yàn)，我們按照“對(duì)照病毒與定制病毒的生物學(xué)應(yīng)用相匹配”的原則給您贈(zèng)送或者推薦對(duì)照病毒。例如，如果定制病毒表達(dá)一個(gè)基因，則推薦的對(duì)照病毒表達(dá)熒光蛋白EGFP。如果定制病毒表達(dá)打靶某個(gè)基因的shRNA，則對(duì)照病毒表達(dá)一個(gè)Scramble shRNA。推薦的對(duì)照病毒信息如下表所示：
| 對(duì)照病毒 | 對(duì)照載體名稱 | 對(duì)照載體ID | 定制病毒 | |||
|---|---|---|---|---|---|---|
EGFP對(duì)照腺病毒，CMV啟動(dòng)子 |
pAV[Exp]-CMV>EGFP |
VB010000-9299hac | 哺乳動(dòng)物基因表達(dá)腺病毒（包含F(xiàn)LEX條件性表達(dá)）、哺乳動(dòng)物腺病毒CRISPR系統(tǒng)、哺乳動(dòng)物非編碼RNA表達(dá)腺病毒 |
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EGFP對(duì)照腺病毒，EF1A啟動(dòng)子（選購(gòu)） |
pAV[Exp]-EF1A>EGFP |
VB900088-2235wrm | ||||
mCherry對(duì)照腺病毒，CMV啟動(dòng)子（選購(gòu)） |
pAV[Exp]-CMV>mCherry |
VB010000-9300kfr | ||||
mCherry對(duì)照腺病毒，EF1A啟動(dòng)子（選購(gòu)） |
pAV[Exp]-EF1A>mCherry |
VB010000-9408agb | ||||
Scramble shRNA對(duì)照腺病毒，EGFP熒光 |
pAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-9300kfr | 哺乳動(dòng)物shRNA干擾腺病毒 |
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Scramble shRNA對(duì)照腺病毒，mCherry熒光 |
pAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0021kwc | ||||
Scramble miR30-shRNA對(duì)照腺病毒，EGFP熒光 |
pAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE |
VB010000-9350dnk | 哺乳動(dòng)物miR30-shRNA干擾腺病毒 |
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FLEX-EGFP對(duì)照腺病毒（選購(gòu)） |
pAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) |
VB010000-9327vmy | 哺乳動(dòng)物基因FLEX條件性表達(dá)腺病毒 |
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為了更好地開(kāi)展您的實(shí)驗(yàn)，我們按照“輔助病毒與定制病毒的生物學(xué)應(yīng)用相匹配”的原則給您推薦輔助病毒。例如，如果定制化的病毒是一個(gè)gRNA腺病毒（只表達(dá)gRNA），則需要一個(gè)表達(dá)Cas9的輔助病毒，才能進(jìn)行CRISPR編輯實(shí)驗(yàn)。推薦的輔助病毒信息如下表所示：
| 對(duì)照病毒 | 對(duì)照載體名稱 | 對(duì)照載體ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
Cas9 腺病毒（選購(gòu)） |
pAV[Exp]-CMV>hCas9 |
VB180820-1032mbq | 哺乳動(dòng)物gRNA 腺病毒（不含Cas9） |
Cre腺病毒（選購(gòu)） |
pAV[Exp]-CMV>Cre |
VB180308-1398jmt | 哺乳動(dòng)物基因FLEX條件性表達(dá)腺病毒 |
| 步驟 | 描述 | 時(shí)間 |
|---|---|---|
 Plasmid linearization and Transfection |
我們常規(guī)使用的第一代腺病毒包裝系統(tǒng)包括1個(gè)含有缺失了E1/E3基因的腺病毒基因組序列的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（Transfer plasmid）和1個(gè)表達(dá)E1基因的包裝細(xì)胞（adenoviral E1-expressing cell line），其包裝流程是通過(guò)內(nèi)切酶PacI將攜帶目的基因（Gene of Interest，簡(jiǎn)稱GOI）的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒線性化。線性化的質(zhì)粒DNA隨后轉(zhuǎn)染到包裝細(xì)胞中，E1基因的表達(dá)產(chǎn)物激活轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上的腺病毒基因的表達(dá)（E3基因的缺失不影響腺病毒的包裝），產(chǎn)生重組腺病毒顆粒。此時(shí)生產(chǎn)出來(lái)的為粗制的腺病毒。 | 第1-6天 |
 Virus amplification |
粗制的腺病毒再次轉(zhuǎn)導(dǎo)到在包裝細(xì)胞中進(jìn)行擴(kuò)增。 | 第7天 |
 Concentration and purification |
對(duì)于非純化的腺病毒，腺病毒可以被細(xì)胞直接分泌到培養(yǎng)基中，然后進(jìn)行收集。對(duì)于超純化腺病毒，則還需要進(jìn)一步的氯化銫（CsCl）密度梯度離心進(jìn)一步純化和濃縮。 | 第24天 |
 Quality Control |
對(duì)于每一個(gè)我們生產(chǎn)的腺病毒，質(zhì)量控制均包括基于免疫組化（IHC）的滴度測(cè)定（Titer determination）、微生物（細(xì)菌和真菌）檢測(cè)（Bioburden test）和支原體檢測(cè)（Mycoplasma test）。 若轉(zhuǎn)移載體同時(shí)編碼一個(gè)熒光蛋白，我們還會(huì)將病毒進(jìn)行細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)以測(cè)定相應(yīng)的熒光表達(dá)情況（Transduction test）。此外，對(duì)于超純化腺病毒，我們還可以檢測(cè)內(nèi)毒素水平（Endotoxin test）。 | 第28天及以后 |
注意： 第三代慢病毒包裝系統(tǒng)只能包裝第三代的慢病毒轉(zhuǎn)移載體。但是第二代慢病毒包裝系統(tǒng)既能包裝第二代，也能包裝第三代的慢病毒轉(zhuǎn)移載體。第三代慢病毒轉(zhuǎn)移載體上的5’ LTR中的U3元件是被一個(gè)外源啟動(dòng)子替代（如CMV啟動(dòng)子或者RSV啟動(dòng)子），使其不依賴Tat蛋白進(jìn)行HIV RNA基因組的轉(zhuǎn)錄，故第三代慢病毒包裝系統(tǒng)的包裝質(zhì)粒不含Tat蛋白。第二代慢病毒轉(zhuǎn)移載體上的5’ LTR是野生型的LTR，含有U3、R和U5元件，依賴Tat蛋白轉(zhuǎn)錄HIV RNA基因組，故第二代慢病毒包裝系統(tǒng)的包裝質(zhì)粒含有Tat蛋白。
我們的滴度保證僅適用于包裝進(jìn)病毒的區(qū)域（從5’ ITR 到3’ ITR）小于腺病毒承載限度（38.7 kb，~野生型HAd5基因組長(zhǎng)度36 kb的108%）的載體。超過(guò)該范圍，超出的那部分序列在包入衣殼時(shí)會(huì)被剪切掉，導(dǎo)致包裝出來(lái)的腺病毒顆粒含有不完整的genome。此外，對(duì)于如下載體，我們同樣不能保證滴度:
