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外泌體（Exosomes）是細(xì)胞外囊泡（Extracellular vesicles, EVs）的一種，大小在30-150nm，由細(xì)胞內(nèi)的多泡小體（Multivesicular bodies,MVB）與細(xì)胞膜融合后以外分泌的形式釋放到細(xì)胞外，廣泛存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中，包括血液、淋巴液、唾液、尿液、精液、乳汁等。
外泌體廣泛參與細(xì)胞間物質(zhì)運(yùn)輸與信息傳遞，調(diào)控細(xì)胞生理活動。同時，外泌體具有抗原提呈、免疫逃逸、誘導(dǎo)正常細(xì)胞轉(zhuǎn)化、促進(jìn)腫瘤發(fā)生和轉(zhuǎn)移等作用；此外，外泌體還可以作為“天然的納米粒子”來進(jìn)行藥物遞送。
外泌體相關(guān)數(shù)據(jù)庫有哪些？
(1) exoRBase數(shù)據(jù)庫收集和描述人類血液外泌體中所有長的RNA，包括circRNA、lncRNA和mRNA。
(2) EVpedia和Vesiclepedia數(shù)據(jù)庫匯總了不同囊泡研究中發(fā)現(xiàn)的蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。
(3) ExoCarta數(shù)據(jù)庫主要收錄了包括人、大鼠、小鼠、綿羊等幾個物種的286個研究結(jié)果，涉及蛋白、mRNA、miRNA、脂類等信息。
樣本預(yù)處理與外泌體分離、保存：
外泌體存在于人類或動物的各種體液中，我們可以選擇不同的樣本來源進(jìn)行相關(guān)的外泌體研究。由于外泌體是來源于細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷的含有脂質(zhì)雙分子層膜結(jié)構(gòu)的多泡小體，分布于胞外基質(zhì)。為了獲得高純度的外泌體，必須確保有效去除所有的細(xì)胞碎片及其他不需要的雜質(zhì)。
| 1）細(xì)胞培養(yǎng)上清 | 2）血漿/血清 | 3）尿液 | 4）腦脊液 |
| 5）卵泡液 | 6）宮腔液 | 7）膽汁 | 8）羊水 |
| 9）羊水 | 10）胸腔液 |
不同的實(shí)驗(yàn)樣本采集時需要注意的地方不一樣，如細(xì)胞培養(yǎng)上清在收集樣本前需換成無外泌體血清培養(yǎng)、血漿樣本采集時用一定不能用肝素抗凝管、尿液收集時需要加抑菌劑等。
從生物體液中分離外泌體的各種方法已經(jīng)被開發(fā)出來，主要根據(jù)外泌體的大小、密度、免疫特性等特點(diǎn)進(jìn)行操作。分離出高純度的外泌體是我們后續(xù)開展外泌體研究的關(guān)鍵步驟，目前差速超速離心是外泌體分離方法中公認(rèn)的“金標(biāo)準(zhǔn)”，也是高分文章中首選的分離方法。
提取的外泌體在短時間（一周之內(nèi)）使用，可以放在4度保存，如果長時間保存可以放在-20度或-80度保存。也可以將外泌體進(jìn)行分裝，分別放在-20度或-80度。
外泌體分離之后，需要經(jīng)過一系列鑒定才能確定分離的是外泌體。鑒定方法從物理特征到表面分子標(biāo)志物，多角度進(jìn)行鑒定。
外泌體內(nèi)含有與細(xì)胞來源相關(guān)的蛋白質(zhì)和核酸，可以運(yùn)輸?shù)鞍踪|(zhì)、mRNA、miRNA、lncRNA、circRNA等進(jìn)入受體細(xì)胞，參與細(xì)胞間通訊。不同細(xì)胞來源的外泌體所含有的蛋白成分和RNA不太相同，可作為多種疾病的早期診斷標(biāo)記物，也能作為靶向藥物的載體進(jìn)行疾病治療。
對分離的外泌體進(jìn)行體外標(biāo)記或活體示蹤，有助于對外泌體的功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究。目前常用親脂性染料對外泌體進(jìn)行標(biāo)記，親脂性染料主要包括兩類，一是PKH67（綠色）和PKH26，二是DiI（橙色熒光）、DiO（綠色熒光）、DiD（紅色熒光）、DiR（深紅色熒光）。
將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中，與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)，觀察細(xì)胞的功能變化，如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等；或者將外泌體注射入動物模型中，觀察動物表型變化和檢測動物相關(guān)指標(biāo)。
1. 差速超速離心分離；
2. 透射電鏡拍攝（TEM）；
3. 納米粒徑跟蹤分析（NTA）；
4. Western Blot檢測蛋白標(biāo)志物；
5. 外泌體高通量測序/芯片；
6. 外泌體標(biāo)記或示蹤；
7. 外泌體細(xì)胞功能檢測；
8. 外泌體動物模型驗(yàn)證等；
