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CRISPR是一種來自細(xì)菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在該機制中Cas蛋白含有兩個核酸酶結(jié)構(gòu)域，可以分別切割兩條DNA鏈。crRNA（CRISPR RNA)和tracrRNA結(jié)合形成復(fù)合物。Cas蛋白中的核酸酶即可對與復(fù)合物結(jié)合的DNA進(jìn)行切割。切割后DNA雙鏈斷裂從而使入侵的外源DNA降解。gRNA識別并結(jié)合在目標(biāo)基因區(qū)域引導(dǎo)Cas9蛋白對結(jié)合位點進(jìn)行切割，引起DNA雙鏈斷裂（DSB），觸發(fā)細(xì)胞自身的非同源末端修復(fù)機制（NHEJ），NHEJ修復(fù)的過程中往往會產(chǎn)生DNA的插入或刪除（Indel），造成移碼突變，致使基因功能喪失，從而實現(xiàn)基因敲除。

多種可選方案適應(yīng)各種細(xì)胞：普通載體，Cas9/Donor腺病毒顆粒，Cas9慢病毒顆粒 豐富的HR Donor Vector載體協(xié)助完成Gene Knock-Out，Knock-in或Gene標(biāo)記。 定制gRNA和HR供體載體設(shè)計服務(wù)。

• 客戶提供

  • 物種、基因名稱或者基因ID
  • 提供培養(yǎng)條件
  • 要敲擊基因的登錄號

• 安震服務(wù)

  • 預(yù)實驗：確定cas9導(dǎo)入細(xì)胞的辦法，進(jìn)行藥物濃度預(yù)實驗，觀察細(xì)胞是否能單克隆培養(yǎng)
  • 基因敲除：靶點設(shè)計、載體構(gòu)建和病毒包裝、內(nèi)源活性篩選、單克隆篩選獲得變型

• 客戶所得

  • 目的敲除穩(wěn)轉(zhuǎn)株
  • 項目報告

1. Cas9腺病毒服務(wù)；

2. Cas9基因敲除(敲入)全套服務(wù)；

3. Cas9慢病毒服務(wù)；

4. Cas9質(zhì)粒構(gòu)建；

5. Cas9病毒包裝；

6. dcas9-SAM轉(zhuǎn)錄激活；

7. dcas9甲基化；

8. dcas9轉(zhuǎn)錄抑制；

9. cas9單堿基編輯（點突變）