0512-63061203
腺相關(guān)病毒（Adeno-associated virus，簡稱AAV）是一種對人類沒有致病性的細小病毒（Parvovirus）。雖然AAV感染在人類中很常見，但與任何已知疾病無關(guān)，加上其轉(zhuǎn)導分裂細胞和靜止細胞的能力、非常低的免疫原性以及轉(zhuǎn)基因長期表達（與野生型AAV病毒感染后整合到宿主細胞DNA不同，重組AAV載體主要作為染色體外游離體長期存在）。這些特性使AAV成為炙手可熱的用于基因治療的病毒載體。我們開發(fā)出一系列專有技術(shù)和試劑，從病毒滴度、純度、活性以及一致性等方面顯著提升了腺相關(guān)病毒包裝工藝水平。
| 目錄號 | 產(chǎn)品信息 | 規(guī)格 | 滴度 | 價格（CNY） | 生產(chǎn)時間 |
|---|---|---|---|---|---|
| H111 | 干擾腺相關(guān)病毒（一個干擾病毒） | 1ml | 1*1012VG/ML | ￥6880 | 15個工作日 |
| H112 | 干擾腺相關(guān)病毒套餐（三個干擾病毒一個陰性對照） | 4*1ml | 1*1012VG/ML | ￥16800 | 20個工作日 |
| H113 | 過表達腺相關(guān)病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1012VG/ML | 基因長度*￥1+￥6880 | 咨詢 |
| H114 | 過表達腺相關(guān)病毒2000bp以下 | 1ml | 1*1012VG/ML | 基因長度*￥1.2+￥7880 | 咨詢 |
| H115 | 腺相關(guān)病毒陰性對照 | 1ml | 1*1012VG/ML | ￥1500 | 10個工作日 |
我們提供的AAV的包裝服務涵蓋以下血清型：
| 血清型 | 組織嗜性 |
|---|---|
| AAV1 | 平滑肌, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 肺, 視網(wǎng)膜, 內(nèi)耳組織, 胰腺, 心臟, 肝 |
| AAV2 | 平滑肌, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 肝, 腎, 視網(wǎng)膜, 內(nèi)耳組織 |
| AAV3 | 平滑肌, 肝, 肺 |
| AAV4 | 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 視網(wǎng)膜, 肺, 腎 |
| AAV5 | 平滑肌, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 肺, 視網(wǎng)膜 |
| AAV6 | 平滑肌, 心臟, 肺, 脂肪組織, 肝 |
| AAV6.2 | 肺, 肝, 內(nèi)耳組織 |
| AAV7 | 平滑肌, 視網(wǎng)膜, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 肝 |
| AAV8 | 平滑肌, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 視網(wǎng)膜, 內(nèi)耳組織, 肝, 胰腺, 心臟, 腎, 脂肪組織 |
| AAV9 | 平滑肌, 肺, 肝, 心臟, 胰腺, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 視網(wǎng)膜, 內(nèi)耳組織, 睪丸, 腎 |
| AAVrh10 | 平滑肌, 肺, 肝, 心臟, 胰腺, 中樞神經(jīng)系統(tǒng), 視網(wǎng)膜, 腎 |
| AAV-DJ | 肝, 心臟, 腎, 脾 |
| AAV-DJ/8 | 肝, 腦, 脾 |
| AAV-PHP.eB | 中樞神經(jīng)系統(tǒng) |
| AAV-PHP.S | 外周神經(jīng)系統(tǒng) |
| AAV2-retro | 脊神經(jīng) |
| AAV2-QuadYF | 內(nèi)皮細胞 |
| AAV2.7m8 | 視網(wǎng)膜, 內(nèi)耳組織 |
注意：攜帶目的基因的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒上的ITR序列來自于AAV2。一般來說，包裝不同血清型的AAV，指的是使用不同血清型的衣殼蛋白表達質(zhì)粒，與攜帶AAV2 ITR的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒進行包裝。
| 生產(chǎn)規(guī)格 | 非純化ssAAV制備服務 | 純化ssAAV制備服務 |
|---|---|---|
| 交付內(nèi)容 |
定制病毒，按照規(guī)格交付：
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定制病毒，按照規(guī)格交付：
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應贈送：
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對照病毒，按照定制病毒的規(guī)格對應選購：
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| 病毒重懸液 | 50 mM Tris緩沖液（添加150 mM NaCl和5 mM MgCl2） | pH7.4 PBS緩沖液（添加200 mM NaCl和0.001% pluronic F-68） |
| 運輸/存儲 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 | 干冰/-80°C，避免反復凍融 |
| 推薦應用 | 體外培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)導 | 體外培養(yǎng)細胞轉(zhuǎn)導、動物體內(nèi)細胞轉(zhuǎn)導 |
為了更好地開展您的實驗，我們按照“對照病毒與定制病毒的生物學應用相匹配”的原則給您贈送或者推薦對照病毒。例如，如果定制病毒表達一個基因，則推薦的對照病毒表達熒光蛋白EGFP。如果定制病毒表達打靶某個基因的shRNA，則對照病毒表達一個Scramble shRNA。推薦的對照病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 | |
|---|---|---|---|---|
EGFP對照AAV病毒 |
pAAV[Exp]-CMV>EGFP:WPRE |
VB010000-9394npt | 哺乳動物基因表達AAV病毒（包含Tet-On誘導表達和FLEX條件性表達）、哺乳動物AAV CRISPR系統(tǒng)、哺乳動物非編碼RNA表達AAV病毒 |
|
mCherry對照AAV病毒 |
pAAV[Exp]-CMV>mCherry |
VB151126-10021 | ||
Scramble shRNA對照AAV病毒，EGFP熒光 |
pAAV[shRNA]-EGFP-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0023jze | 哺乳動物shRNA干擾AAV病毒 |
|
Scramble shRNA對照AAV病毒，mCherry熒光 |
pAAV[shRNA]-CMV>mCherry-U6>Scramble_shRNA |
VB010000-0024wah | ||
Scramble miR30-shRNA對照AAV病毒，EGFP熒光 |
pAAV[miR30]-CMV>EGFP:Scramble_miR30-shRNA:WPRE |
VB010000-9397wgw | 哺乳動物miR30-shRNA干擾AAV病毒 |
|
Tet-On EGFP 對照AAV病毒（選購） |
pAAV[Tet_on]-TRE>EGFP-CBh>tTS:T2A:rtTA |
VB010000-0053bw | 哺乳動物基因Tet-On誘導表達AAV病毒 |
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FLEX-EGFP對照AAV病毒（選購） |
pAAV[FLEX_on]-CMV>rev(EGFP) |
VB180820-1044gcq | 哺乳動物基因FLEX條件性表達AAV病毒 |
|
為了更好地開展您的實驗，我們按照“輔助病毒與定制病毒的生物學應用相匹配”的原則給您推薦輔助病毒。例如，如果定制病毒是一個只含TRE啟動子的TetOn慢病毒，則需要一個表達rtTA的輔助病毒，才能進行誘導表達實驗。推薦的輔助病毒信息如下表所示：
| 對照病毒 | 對照載體名稱 | 對照載體ID | 定制病毒 |
|---|---|---|---|
SaCas9 AAV病毒（選購） |
pAAV[Exp]-CMV>saCas9 |
VB180125-1089ffa | 哺乳動物gRNA AAV病毒（不含Cas9） |
Cre AAV病毒（選購） |
pAAV[Exp]-CMV>Cre |
VB171024-1202yau | 哺乳動物基因FLEX條件性表達AAV病毒 |
| 步驟 | 描述 | 時間 |
|---|---|---|
 Triple-transfection |
我們常規(guī)使用的helper-free腺相關(guān)病毒包裝系統(tǒng)包括1個轉(zhuǎn)移質(zhì)粒（Transfer plasmid）、1個Rep和Cap表達質(zhì)粒（Rep-Cap plasmid）和1個輔助質(zhì)粒（Helper plasmid），其包裝過程是將攜帶目的基因（Gene of Interest， 簡稱GOI）和ITR序列的轉(zhuǎn)移質(zhì)粒、表達特定血清型衣殼蛋白的Rep-Cap質(zhì)粒和編碼介導腺相關(guān)病毒復制的腺病毒基因（E2、E2A和VA）的輔助質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK293T包裝細胞，這個轉(zhuǎn)染過程稱為三質(zhì)粒轉(zhuǎn)染（Triple-transfection）。 | 第1天 |
 Supernatant collection |
在細胞里，轉(zhuǎn)導質(zhì)粒表達包含目的基因（Gene of Interest, GOI）的AAV基因組，Rep-Cap質(zhì)粒表達特定血清型的AAV衣殼蛋白，輔助質(zhì)粒表達輔助AAV基因組表達翻譯的組分。三者共同作用從而在細胞中生成完整的AAV病毒顆粒。細胞短暫孵育后，根據(jù)血清型的不同，收集上清或者細胞裂解液獲取病毒顆粒。 | 第3天 |
 Concentration and purification |
PEG濃縮病毒顆粒。對于超純化腺相關(guān)病毒（體內(nèi)應用級別），再通過氯化銫（CsCl）密度梯度離心對病毒顆粒進一步純化和濃縮。 | 第5天 |
 Quality Control |
對病毒采用ITR qPCR方法進行滴度測定（Titer determination）、并且還進行微生物檢測（Bioburden test，針對細菌、真菌）、支原體檢測（Mycoplasma test）等。 若轉(zhuǎn)移載體同時編碼一個熒光蛋白，我們還會將病毒進行細胞轉(zhuǎn)導以測定相應的熒光表達情況（Transduction test）。此外，對于超純化AAV病毒，我們還可以檢測內(nèi)毒素水平（Endotoxin test）和使用SDS-PAGE方法檢測病毒純度（Virus purity test）。。 | 第7天及以后 |
我們的滴度保證僅適用于包裝進病毒的區(qū)域（從5’ ITR到3’ ITR）小于腺相關(guān)病毒承載限度（4.7 kb，～野生型AAV2基因組長度）的載體。超過該范圍，超出4.7 kb的那部分序列在包入衣殼時會被剪切掉，導致包裝出來的AAV病毒顆粒含有不完整的genome，不僅影響ITR qPCR滴度檢測，而且影響轉(zhuǎn)基因表達。此外，對于如下情況，我們同樣不能保證滴度：
