高潮videossexohd潮喷,成全动漫视频在线观看免费播放,欧美亚洲综合另类色妞网,亚洲无线码高清在线观看

外源基因在細(xì)胞中的表達(dá)可分為兩大類，一類是瞬時(shí)表達(dá)，外源DNA/RNA不整合到宿主染色體中，雖然可以達(dá)到高水平的表達(dá)，但通常只持續(xù)幾天；一類是穩(wěn)定表達(dá)（構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株），外源DNA整合到宿主細(xì)胞染色體上，使宿主細(xì)胞可長(zhǎng)期表達(dá)目的基因。

建立穩(wěn)定細(xì)胞株，基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選。最常用的真核表達(dá)載體的抗性篩選標(biāo)志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白、或穩(wěn)定沉默特定基因的細(xì)胞株。

慢病毒感染篩選穩(wěn)定細(xì)胞株

利用慢病毒整合表達(dá)特性來(lái)篩選穩(wěn)定細(xì)胞株，該方法克服了傳統(tǒng)質(zhì)粒挑單克隆方法周期久的弊端，可以在短時(shí)間內(nèi)高效獲取穩(wěn)定細(xì)胞株。

利用慢病毒制備穩(wěn)定株優(yōu)勢(shì)

• 細(xì)胞適用種類廣泛，可用于各種哺乳動(dòng)物細(xì)胞；
• 構(gòu)建穩(wěn)轉(zhuǎn)株時(shí)間短，表達(dá)持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)；
• 多種熒光標(biāo)記和抗性基因可選，滿足觀測(cè)實(shí)驗(yàn)要求。

HUVEC

HepG2

混合克隆穩(wěn)定細(xì)胞株:

• 混合克隆細(xì)胞系是基因轉(zhuǎn)染后直接用抗藥篩選得到的，篩選出的細(xì)胞都表達(dá)抗性基因和目的基因，但包含了各種不同的細(xì)胞克隆。不同克隆的目的基因整合位置和表達(dá)量均有所不同。
• 混合克隆細(xì)胞株篩選比較快速，費(fèi)用較低。在需要構(gòu)建的細(xì)胞株轉(zhuǎn)染效率高，目的基因表達(dá)效率高的情況下，單克隆細(xì)胞株最后得到的表達(dá)效果和混合克隆細(xì)胞株并沒(méi)有顯著差異，這時(shí)多克隆細(xì)胞篩選是理想的選擇。

單克隆穩(wěn)定細(xì)胞株:

• 單克隆細(xì)胞系是由含有穩(wěn)定整合外源片段的單個(gè)細(xì)胞的擴(kuò)增得到的細(xì)胞株，每個(gè)細(xì)胞的目的基因整合位置的表達(dá)量均高度一致，但可能丟失一些表型。單克隆細(xì)胞株篩選周期長(zhǎng)，費(fèi)用高。需要進(jìn)行細(xì)胞亞定位實(shí)驗(yàn)的細(xì)胞系，難感染的和表達(dá)率低的通常建議進(jìn)行單克隆細(xì)胞篩選。

• 客戶提供

  • 目的基因名稱，種屬等信息
  • 載體需求（抗性、熒光、便簽等）
  • 目的細(xì)胞等信息
  • 其它特殊需求

• 安震服務(wù)

  • 細(xì)胞預(yù)實(shí)驗(yàn)
  • 質(zhì)粒構(gòu)建表達(dá)檢測(cè)
  • 慢病毒包裝與純化
  • 穩(wěn)定株篩選及鑒定

• 客戶所得

  • 構(gòu)建好的穩(wěn)定株
  • 構(gòu)建好的穩(wěn)定株
  • 構(gòu)建的質(zhì)粒，病毒等

Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats（CRISPR）/Cas9是細(xì)菌和古細(xì)菌在長(zhǎng)期進(jìn)化而形成的一種適應(yīng)性免疫防御機(jī)制，CRISPR/Cas9系統(tǒng)可以用于各種基因組的編輯。CRISPR/Cas9系統(tǒng)會(huì)通過(guò)小導(dǎo)向RNA(sgRNA)對(duì)切割區(qū)域進(jìn)行識(shí)別，并利用Cas9內(nèi)切酶實(shí)現(xiàn)在識(shí)別位點(diǎn)中間預(yù)測(cè)的位置切割，造成DNA雙鏈斷裂，在細(xì)胞進(jìn)行易錯(cuò)修復(fù)后造成隨機(jī)的突變。CRISPR/Cas9系統(tǒng)其突變效率高、靈活簡(jiǎn)單，周期短，成本低，已經(jīng)被廣泛的應(yīng)用于基因編輯的研究。CRISPR/Cas9系統(tǒng)應(yīng)用最多的領(lǐng)域是基因敲除株系構(gòu)建和基因敲除動(dòng)物的研究。

公司可提供項(xiàng)目服務(wù)包括：CRISPR/Cas9實(shí)驗(yàn)方案設(shè)計(jì)、CRISPR/Cas9基因敲除載體構(gòu)建、CRISPR/Cas9基因敲除載體病毒包裝、CRISPR/Cas9基因敲除細(xì)胞株構(gòu)建

CRISPR/Cas基因組編輯原理

• 定制特定基因敲除細(xì)胞系只需提供基因名稱
• 快速獲得有效sgRNA，基因編輯效率高
• 實(shí)驗(yàn)周期短
• 可根據(jù)需要提供CRISPR/Cas9慢病毒包裝服務(wù)

1. 靶向目的序列sgRNA的設(shè)計(jì)、載體構(gòu)建及活性驗(yàn)證

2. 目的細(xì)胞系共轉(zhuǎn)染，初步篩選混合克隆

3. 鋪單克隆，單克隆篩選及鑒定細(xì)胞基因型

4. 陽(yáng)性細(xì)胞株的擴(kuò)增

構(gòu)建穩(wěn)定細(xì)胞系的基本原理是將外源DNA克隆到具有某種抗性的載體上，載體被轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞并整合到宿主染色體中，用載體中所含的抗性標(biāo)志進(jìn)行篩選。最常用的真核表達(dá)載體的抗性篩選標(biāo)志物有新霉素（neomycin）、潮霉素（hygromycin）和嘌呤霉素(puromycin)，常用G418來(lái)代替新霉素進(jìn)行選擇性篩選，篩選得到可穩(wěn)定表達(dá)目的蛋白，或者穩(wěn)定表達(dá)沉默特定基因的細(xì)胞株。

慢病毒幾乎可以感染所有種類的細(xì)胞，并且在感染后可以整合到受感染細(xì)胞的基因組，進(jìn)行長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定表達(dá)，因此，慢病毒常用于制備穩(wěn)定表達(dá)/沉默特定基因的單克隆細(xì)胞株。

安震生物制備的帶puromycin抗性的慢病毒，在感染目的細(xì)胞后，可通過(guò)加入puromycin進(jìn)行選擇性篩選，從而獲得穩(wěn)定表達(dá)shRNA或者特定基因的細(xì)胞株。

• 構(gòu)建細(xì)胞模型，用于后續(xù)基因功能研究和基因治療研究等
• 適用于體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，用于裸鼠成瘤
• 用于藥物靶篩選、細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路分析及蛋白質(zhì)相互作用等

1. 過(guò)表達(dá)慢病毒構(gòu)建與包裝；

2. 慢病毒包裝/擴(kuò)增；

3. miRNA慢病毒。